143B人骨肉瘤細(xì)胞|通過STR鑒定高活性

143B人骨肉瘤細(xì)胞|通過STR鑒定高活性

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱人骨肉瘤細(xì)胞

細(xì)胞別稱143B

細(xì)胞貨號(hào)SNL-192

細(xì)胞種屬人

生長(zhǎng)情況貼壁

培養(yǎng)條件H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期2-3天

培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細(xì)胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化；

6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)不同品牌胰M消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間

消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);

凍存規(guī)格200-300萬(wàn)/ml，1ml每管

凍存方法1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項(xiàng)凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案