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bv2細(xì)胞是小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞

更新時(shí)間:2022-05-07瀏覽:1015次

  bv2細(xì)胞是小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞,用于測試這些小兒HGG細(xì)胞激活小膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤支持表型的能力,是組蛋白H3野生型并表達(dá)大量的H3K27的三甲基化形式,以及其乙酰化形式。可以觀察到DIPG腫瘤是由H3-K27M陽性和陰性的細(xì)胞混合組成的,H3K27me3和H3K27ac的表達(dá)水平不一樣。對三個(gè)不同DIPG患者的腫瘤組織進(jìn)行的免疫組化分析證實(shí),DIPG癌細(xì)胞為H3-K27M陽性,而其微環(huán)境中表達(dá)IBA1的小膠質(zhì)細(xì)胞不攜帶該突變。我們表明,與它們的組蛋白H3狀態(tài)無關(guān),即不論是野生型H3還是H3-K27M突變型,小兒HGG細(xì)胞都能夠使BV2小膠質(zhì)細(xì)胞向腫瘤支持型極化,這表現(xiàn)在它們能夠支持HGG癌細(xì)胞對基質(zhì)的入侵能力。
 
  接下來,我們檢查了一氧化氮合酶-2(Nos2)基因的表達(dá),因?yàn)槠浔磉_(dá)的誘導(dǎo)與小膠質(zhì)細(xì)胞的促炎癥表型有關(guān),而其表達(dá)在暴露于膠質(zhì)瘤被大幅抑制。膠質(zhì)瘤細(xì)胞甚至可以有效地減少LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞中NOS2的表達(dá)。因此,通過抑制Nos2基因的表達(dá)進(jìn)一步說明了小膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤支持表型的獲得,該基因編碼誘導(dǎo)型一氧化氮合酶,是小膠質(zhì)細(xì)胞極化為免疫抑制和促進(jìn)腫瘤激活狀態(tài)的分子特征。
 
  在bv2細(xì)胞中對H3K27me3和乙酰化H3K27(H3K27ac)富集的染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)進(jìn)行了分析。事實(shí)上,Nos2啟動(dòng)子上的H3K27me3數(shù)量明顯減少,這反映了一個(gè)轉(zhuǎn)錄更活躍的基因位點(diǎn)。同時(shí),與siCtrl相比,在siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞中觀察到H3K27ac的富集,這與更高的轉(zhuǎn)錄激活有關(guān),盡管并不明顯。接下來,我們調(diào)查了有效的抗腫瘤細(xì)胞因子ll1b的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在與H3.3野生型SF188腫瘤細(xì)胞、H3-K27M SF8628或第二個(gè)患者衍生的DIPG細(xì)胞系SU-DIPG-XIII共培養(yǎng)時(shí),這種細(xì)胞因子在小膠質(zhì)細(xì)胞中沒有被誘導(dǎo)然而,我們發(fā)現(xiàn)siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的Il1b水平升高,即使與SF188腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng),Il1b水平仍保持不變。為了進(jìn)一步證實(shí)Il1b可能是H3K27me3的重要靶點(diǎn),我們用炎癥源脂多糖(LPS)治療siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞。

 

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