細胞培養(yǎng)（Ce11culture）是模擬機體內生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發(fā)展成一種重要生物技術，并取得顯著成就。由體內直接取出組織或細胞進行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)細胞離體時間短，性狀與體內相似，適用于研究。一般說來，幼稚狀態(tài)的組織和細胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養(yǎng)。

　　小鼠原代細胞的分離及細胞計數操作：

　　1、取材

　　用頸椎脫位法使小鼠迅速死亡。然后，把整個動物浸入盛有75，乙醇的燒杯中數秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用消過毒的剪刀剪開用乙醇再次消毒后的皮膚，剖腹取出內臟器官或組織。置于無菌平皿中。

　　2、切割

　　用滅菌的PBS液將取出的臟器或組織清洗三次，然后用眼科手術剪刀仔細將組織反復剪碎，直到成1m左右的小塊，再用PBS清洗，洗到組織塊發(fā)白為止。移入無菌離心管中，靜置數分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清。

　　3、消化

　　吸取0.25，胰蛋白酶--0.02，EDTA混合消化液1ml，加入離心管中，與組織塊混勻后，加上管口塞子，37℃水浴中消化30分鐘，每隔5分鐘搖動一下試管，使組織與消化液充分接觸，靜止，吸去上清。

　　4、制備單細胞懸液

　　向含有經消化的器官或組織的離心管中加入2-3ml含10%小牛血清的DWEM培養(yǎng)基，用吸管吸打數次，直到看不到塊狀組織。

　　5、細胞計數

　　1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。2.將細胞懸液滴入計數板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.統(tǒng)計四個大格的細胞數：將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數板，當看到鏡中出現計數方格后，數出四角的四個大格（每個大格含有16個中格）中的細胞數目。4.計算原細胞懸液的細胞數即可。